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医用显微镜简介 2015 05 27 显微镜的概念 显微镜是用于放大微小物体使人肉眼能够看到的光学仪器 是人类进入原子时代的标志 显微镜的发展简史 16世纪 荷兰的眼镜商詹森 ZacchariasJanssen 和他的显微镜 世界上最早的一台显微镜 显微镜的发展简史 17世纪 罗伯特虎克 RobertHook 改进了显微镜 并发现了细胞 列文虎克 AntonyvanLeeuwenhoek 首次用显微镜发现微生物 显微镜的发展简史 17世纪 现代的光学显微镜 显微镜的发展简史 18 19世纪 显微镜分类 光学显微镜 电子显微镜 光学显微镜可分为 普通光学显微镜暗视野显微镜相差显微镜荧光显微镜倒置显微镜体视显微镜偏光显微镜等10多种 显微镜分类 电子显微镜可分为 透射电子显微镜扫描电子显微镜分析电子显微镜高压电子显微镜 显微镜分类 光学显微镜可把物体放大2000倍 分辨的最小极限达0 1微米 看到细胞和部分细胞器 如线粒体和叶绿体 但只能看到其存在 看不到细胞器的具体结构 如叶绿体的基粒 线粒体的脊就不能看到 电子显微镜最大放大倍率超过300万倍 可以看到细胞器的精细结构 甚至可以看到病毒这种最小生物的结构 更甚至可以看到大分子 如蛋白质 普通光学显微镜 原理 普通光学显微镜由光学系统 机械装置和照明系统三部分组成 光学系统由物镜和目镜组成 目镜和物镜都是凸透镜 焦距不同 物体通过物镜成倒立 放大的实像 目镜相当于普通的放大镜 该实像又通过目镜成正立 放大的虚像 经显微镜到人眼的物体都成倒立放大的虚像 普通光学显微镜 构造 机械部分 镜座 镜臂 镜筒 物镜转换器 载物台 粗准焦螺旋 细准焦螺旋照明部分 反光器 聚光器光学部分 目镜 物镜 普通光学显微镜 构造 目镜 装在镜筒的上端 通常备有1 3个 上面刻有5 10 或15 符号以表示其放大倍数 一般装的是10 的目镜 物镜 装在镜筒下端的旋转器上 一般有3 4个物镜 10 符号的为低倍镜 较长的刻有 40 符号的为高倍镜 最长的刻有 100 符号的为油镜 物镜常加有一圈不同颜色的线 以示区别 显微镜的放大倍数是物镜的放大倍数与目镜的放大倍数的乘积 显微镜目镜长度与放大倍数呈负相关 物镜长度与放大倍数呈正相关 即目镜长度越长 放大倍数越低 物镜长度越长 放大倍数越高 普通光学显微镜 用途 普通光学显微镜在医学中主要是用来生物切片 细胞 细菌以及活体组织培养 流质沉淀等的观察和研究 普通光学显微镜 检验中的应用 在临床检验中 普通光学显微镜的使用频率高 其中临床检验基础 血液学检验 微生物学检验等都要用到显微镜 体液室 尿常规复查镜检 粪便常规镜检 胸腹水常规细胞计数 脑脊液常规细胞计数 脑脊液细胞学 1小时尿细胞计数及尿红细胞形态等 临检室 血常规有20 左右的标本需要进行显微镜复检 微生物室 细菌涂片 真菌涂片 结核菌涂片 培养标本菌落涂片 血培养报阳涂片 墨汁染色等 普通光学显微镜 使用注意事项 观察标本时 先使用低倍接物镜 转换高倍镜或油镜时转动速度要慢 并从侧面进行观察 防止镜头碰撞玻片 镜头碰到玻片 说明低倍镜的焦距没有调好 应重新操作 使用高倍镜观察液体标本时 一定要加盖玻片 否则 不仅清晰度下降 而且试液容易浸入高倍镜的镜头内 使镜片遭受污染和腐蚀 油镜使用后 一定要擦拭干净 香柏油在空气中暴露时间过长 就会变稠和干涸 到这时再去擦拭就比较困难了 镜片上留有油渍 清晰度必然下降 微调是显微镜机械装置中较精细而又容易损坏的元件 拧到了限位以后 就拧不动了 此时决不能强拧 否则 必然损坏 带有光源的显微镜 需要调节亮度旋钮将光亮度调至最暗 再关闭电源按钮 以防止下次开机时瞬间过强电流烧坏光源灯 普通光学显微镜 保养 防潮防尘防腐蚀防震与放热机械部件的清洁可用面纱或绸布擦拭 不能使用乙醇 乙醚等有机溶剂擦拭 以免损伤漆面光学系统的清洁如镜片表面有擦不掉的污物 油渍或手指印镜片生雾长霉时 可用20 左右的酒精和80 左右的乙醚配置清洗剂进行清洗 清洗时应用软毛刷或棉球沾有少量清洗剂 从镜头中心向外做圆运动 切忌把这类镜头浸泡在清洗剂中清洗 清洗镜头时不要用力擦拭 否则会损伤增透膜 损坏镜头严禁用干棉球 干布块或干镜头纸擦拭镜头表面 否则会刮伤镜头表面 严重损坏镜头 也不能用水擦拭镜头 否则会留下水渍 而且会滋生真菌 损坏镜头 暗视野显微镜 原理 暗视野显微镜是在普通光学显微镜的基础上构成的 其用强而窄的斜射光束照射标本 而又不让光束进入物镜 在没有光进入物镜时 视野是黑暗的 故叫暗视野显微镜 而标本中的微粒受光照射后能够散射光线 当散射光线进入物镜时 在显微镜中能够看到微粒的散射光点 好象微粒本身在发光一样 暗视野显微镜 用途 暗视野显微镜常用来观察未染色的透明样品 这些样品因为具有和周围环境相似的折射率 不易在一般明视野之下看的清楚 于是利用暗视野提高样品本身与背景之间的对比 但只能看到物体的存在 运动和表面特征 不能辨清物体的细微结构 暗视野显微镜常用于检查梅毒螺旋体 对早期梅毒的诊断有十分重要的意义 相差显微镜 原理 光波有振幅 亮度 波长 颜色 及相位 指在某一时间上光的波动所能达到的位置 的不同 当光通过物体时 如波长和振幅发生变化 人们的眼睛才能观察到 这就是普通显微镜下能够观察到染色标本的道理 而活细胞和未经染色的生物标本 因细胞各部微细结构的折射率和厚度略有不同 光波通过时 波长和振幅并不发生变化 仅相位有变化 而这种微小的变化 人眼是无法加以鉴别的 故在普通显微镜下难以观察到 而相差显微镜可以把相差变为振幅差来观察活细胞和未染色的标本 相差显微镜 用途 相差显微镜主要用于观察活细胞或不染色的组织切片 有时也可用于观察缺少反差的染色样品 可以观察到透明标本的细节 适用于对活体细胞生活状态下的生长 运动 增殖情况及微细结构的观察 荧光显微镜 原理 荧光显微镜是以紫外线为光源 用以照射被检物体 使之发出荧光 然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置 细胞中有些物质 受紫外线照射后可发荧光 另有一些物质本身虽不能发荧光 但如果用荧光染料或荧光抗体染色后 经紫外线照射亦可发荧光 荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一 荧光显微镜 用途 荧光显微镜可用于观察检测细胞中能与荧光染料特异结合的特殊蛋白 核酸等 用于研究细胞内物质的吸收 运输 化学物质的分布及定位等 一般用于组织细胞学 微生物学 寄生虫学 病理学的研究以及自身免疫病的诊断 电子显微镜是根据电子光学原理 用电子束和电磁透镜代替光束和光学透镜 作用于被检样品的电子束经电磁透镜放大后打到荧光屏上成像 使物质的细微结构在非常高的放大倍数下成像 电子显微镜 成像原理 镜筒 电子枪 电子透镜 样品架 荧光屏和照相机构真空系统 机械真空泵 扩散泵和真空阀门等电源柜 高压发生器 励磁电流稳流器和各种调节控制单元组成 电子显微镜 构造 电子显微镜 用途 电子显微镜自医学中可用于细胞和微生物 包括病毒 细菌 真菌 等表面及其内部结构的观察 电子显微镜下的淋巴细胞 电子显微镜下的细菌 电子显微镜 用途 电子显微镜下的红细胞 电子显微镜下的血凝块 电子显微镜 缺点 电子显微镜购买和维护的价格都比较高 组织细胞标本的制备程序较复杂 技术难度和费用都较高 电子显微镜中样本必须在真空中观察 因此无法观察活样本 在处理样本时可能会产生样本本来没有的结构 这加剧了此后分析图像的难度 电子束可能通过碰撞和加热破坏样本 29 谢谢